Tech Snapshot® captura las herramientas y tecnologías de vanguardia actuales que ayudarán a impulsar los descubrimientos de fármacos de mañana. Esta entrega fue escrita por BPS Bioscience, una empresa de exposición y fabricación de biotecnología centrada en la innovación de proteínas, anticuerpos, líneas celulares, lentivirus y kits de monografía para la investigación biofarmacéutica y académica. BPS Bioscience se esfuerza por avanzar nuevos descubrimientos científicos que conduzcan a terapias mediante la creación de soluciones innovadoras de inicio a final para la investigación. Impulsamos los avances en inmunoterapia, epigenética, coronavirus, señalización celular y otras áreas de investigación, proporcionando más de 4500 líneas celulares recombinantes de incorporación calidad, herramientas basadas en virus, proteínas y kits de monografía bioquímico y basado en bóveda celeste células centradas en el descubrimiento de fármacos. Una de nuestras áreas de experiencia básicas es la ingeniería de líneas celulares para el descubrimiento de fármacos, proporcionando sistemas celulares que permiten el cribado de compuestos de suspensión rendimiento mediante lecturas celulares. Los ensayos basados ​​en células son parte esencial del exposición de fármacos, ya que permiten a los investigadores evaluar la actividad biológica de posibles candidatos a fármacos sobre células vivas y obtener una mejor comprensión de su mecanismo de batalla. Son necesarios para evaluar problemas de permeabilidad de la membrana e interferencias adentro de un sistema engorroso que no se ven en ensayos bioquímicos. Por lo normal, proporcionan una representación más precisa de las interacciones complejas entre compuestos y células vivas, en comparación con los ensayos bioquímicos. Las células diseñadas genéticamente sirven como sistemas maniquí en una variedad de aplicaciones de investigación, incluida la sobreexpresión de una proteína diana o líneas celulares eliminadas que pueden utilizarse para validar objetivos terapéuticos candidatos, evaluar nuevos compuestos y enfoques terapéuticos y mucho más. Para identificar y caracterizar a los efectores de las vías de señalización celular en el contexto de células que funcionan intactas, los ensayos de reportero inducibles son una opción ideal. Los reporteros de la luciferasa aguas debajo de un medio ambiente de respuesta del promotor específico de la vía permiten una medida sencilla, robusta y cuantitativa de la actividad de señalización. Son perfectas para ensayos de co-cultivo porque la presencia de células efectoras no va a interferir con las medidas. Los sistemas de reporteros condicionales se pueden aplicar a una gran variedad de tipos de células y vías de señalización y permiten un cribado de suspensión rendimiento de grandes bibliotecas de compuestos para funciones inhibidoras o activadoras, apoyando la investigación que albarca inmunoterapia , evaluación eficaz de CAR y TCR, ensayos ADCC, señalización celular. estudios, experimentos de cocultura, publicación de ARN y mucho más. Aplicaciones: Cronometrar la activación o inhibición de una vía de señalización celular que converge en un divisor de transcripción específico: Identificar a nuevos agonistas o antagonistas de una vía de señalización. Examine las bibliotecas de compuestos para moléculas que alteren selectivamente un objetivo de interés o la vía de la enfermedad. Descifrar el mecanismo de batalla de un compuesto candidato. Estudiar los parámetros que afectan a una vía de interés (investigación de función). Realice ensayos de citotoxicidad de cocultivo como los que se utilizan en el exposición de inmunoterapia para probar la fuerza de una nueva célula inmune efectora. BPS Bioscience ha desarrollado una colección de líneas celulares específicas de la vía, incluidas células informadoras sensibles a IL-2, IL-15 e IL-6; Células sensibles a GLP-1 para ayudar al exposición de fármacos para la diabetes/obesidad; Células Jurkat sensibles a TL1A que sobreexpresan el receptor TL1-A DDR; células CAR-T primarias diseñadas para apoyar la investigación sobre BCMA, CD20 o CD19; y una nueva sarta de células TCR específicas de antígeno para controlar las respuestas a la presentación de antígeno. El ligando 1A similar al TNF (TL1A, incluso conocido como inhibidor del crecimiento del endotelial vascular) es un mediador de la inflamación de citocinas anti-angiogénicos, que participa en la homeostasis inmune innata y adaptativa mediante la unión a su receptor DR3 y la activación. señalización aguas debajo. Estudios clínicos recientes han demostrado la promesa del tratamiento con anticuerpos antiTL1A para tratar trastornos inflamatorios. Las células Jurkat del reportero de luciferasa DR3/NF-kB sensibles a TL1A expresan luciferasa de luciérnaga bajo el control de medios de respuesta NF-kB, así como DR3 humano (receptor de homicidio 3; o TNFRSF25). La activación de la vía de señalización NF-kB por TL1A puede controlarse midiendo la actividad de la luciferasa. Figura 1: Representación esquemática de la respuesta TL1A en la sarta celular Jurkat del reportero Luciferase Responsive TLA-1 (BPS Bioscience #78811). Hacia lo alto a la derecha: las células se trataron con concentraciones crecientes de TL1A durante 5 horas ayer de realizar un monografía de luciferasa ONE-Step™ (BPS Bioscience 60690). Las células Jurkat que no expresan DR3 (sarta celular Jurkat del reportero de luciferasa NF-kB, BPS Bioscience #60651) no muestran incitación por TL1A. En la parte inferior derecha: el anticuerpo neutralizante anti-TL1A (BPS Bioscience #101729) se preincubó con 1 µg/ml de TL1A humano durante 1 hora ayer de añadirse a las células durante 5 horas. La actividad de la luciferasa se evaluó mediante el reactivo de detección de luciferasa ONE-Step™. MART-1-Specific TCR (DMF4) CD8+ NFAT-Luciferase Reportero Jurkat Cell Line MART-1 (antígeno asociado al melanoma agradecido por las células T-1, incluso conocido como Melan-A) es un antígeno de diferenciación expresado en la superficie de los melanocitos. Un fragmento peptídico de la proteína se encuentra en los complejos MHC que son reconocidos por las células T citotóxicas CD8+. MART-1 está presente en la mayoría de los cánceres de piel, incluidos los melanomas, y se utiliza como biomarcador con fines diagnósticos. Legado que la expresión de la proteína se limita a los tejidos que contienen melanocitos (piel y retina), MART-1 es un objetivo atractivo para las vacunas contra el cáncer y la terapia celular adoptiva. El péptido MART-1 26-35 es un fragmento asociado asiduamente al MHC y agradecido por los receptores de células T. Esta sarta celular expresa luciferasa de luciérnaga bajo el control de medios de respuesta NF-kB. La exterminio del TCR (receptor de células T) se realizó mediante la publicación del genoma CRISPR/Cas9. Así, se eliminaron genéticamente los dominios TRAC (T-Cell Receptor Alpha Constant) y TRBC1 (T-Cell Receptor Beta Constant 1) de las cadenas TCRα/β y las células no responden a los agonistas CD3. Las células se modificaron aún más para sobreexpresar CD8 humano y TCR específico de MART-1 (clon DMF4). El clon de TCR humano DMF4 reconoce específicamente el antígeno tumoral MART-1. Las células son estimuladas por la presencia de un péptido MART-1 en MHC-I presentado por células cancerígenas o por células presentadoras de antígeno. Son avíos para diseñar y optimizar los bioensayos de cocultivo utilizados en proyectos de exposición de células TCR y pueden utilizarse como control positivo en experimentos que evalúan células que expresan TCR específicas de MART-1. Figura 2; superior: Ilustración del monografía de cocultivo eficaz mediante la sarta celular MART-1 TCR (DMF4) CD8+ NFATα Luciferase Reporter Jurkat (BPS Bioscience #78772). En la parte inferior izquierda: MART-1 TCR (DMF4) CD8 + NFAT Luciferase Reporter Las células Jurkat se mancharon con Dextramer MHC-I conjugado con APC y se analizaron mediante citometría de flujo (azur). Las células Jurkat del reportero de luciferasa NFAT CD8 + TCR parentales se utilizaron como control gafe (rojo). En la parte inferior derecha: MART-1 TCR (DMF4) CD8 + NFAT Luciferase Reporter Las células Jurkat se cocultivaron durante 6 horas con células T2 cargadas con diversas concentraciones de péptidos MART-1 (BPS Bioscience #78759, # 78760 y #78761) ayer de realizarlas. un monografía de luciferasa ONE-Step™. Las variantes del péptido MART-1 tienen diferentes afinidades por MART-1, con MART-1 (26-35, Leu 27) mostrando la más incorporación afinidad y MART-1 (27-35) la más pérdida. Las células reporteros de luciferasa ofrecen soluciones elegantes para la detección bioluminiscente rápida y cuantitativa de prácticamente cualquier respuesta celular de interés, permitiendo el cribado y caracterización de compuestos que regulan las vías de señalización, el estudio de funciones biológicas o la identificación de actores secreto adentro de una vía. Nuestra cartera albarca diversas áreas de investigación como cáncer, enfermedades neurológicas, diabetes y trastornos metabólicos, así como enfermedades cardiovasculares. Adicionalmente, las células reporteros están disponibles para apoyar el exposición de terapias celulares adoptivas y para la optimización de productos biológicos basados ​​en anticuerpos. Se diseñó un conjunto de productos de soporte, que incluyen medios de cultivo celular optimizados y el sistema de monografía de luciferasa ONE-Step™ extremista simple, para racionalizar sus proyectos. Obtenga más información sobre las opciones de importación de la sarta celular de BPS Bioscience y los términos de osadía en nuestra página de líneas celulares. Conéctate con BPS Bioscience en Scientist.com

Source link