CellEDIT: un nuevo enfoque para la edición CRISPR sin vectores a partir de celdas individuales

Desafíos en la ingeniería del genoma CRISPR y CellEDIT: una solución precisa y elegante

Esta publicación de blog fue escrita por Cytosurge, un proveedor de servicios de desarrollo de líneas celulares que se dedica a satisfacer la necesidad insatisfecha de implementar diseños genéticos complejos en líneas celulares de mamíferos editadas con genes.

Desde el descubrimiento de la tecnología CRISPR por parte de Jennifer Doudna y Emmanuelle Charpentier, ganador del Premio Nobel, esta herramienta de edición de genes ha revolucionado la biología al permitir una edición precisa del ADN. Sin embargo, el uso de CRISPR para la edición del genoma presenta desafíos, como entregar componentes CRISPR de manera eficiente al núcleo celular, evitar la integración aleatoria de vectores y garantizar el equilibrio correcto de los componentes CRISPR (estequiometría) para mejorar la edición múltiple y minimizar los efectos fuera del objetivo.

Los métodos tradicionales, como los vectores virales, pueden conducir a una integración aleatoria, lo que reduce la precisión y la coherencia en la edición de genes. CellEDIT, descrito en un seminario web reciente por el Dr. Tobias Beyer, director científico y científico de aplicaciones de Cytosurge, aborda estos problemas ofreciendo un nuevo enfoque.

Utilizando Nanosyringe FluidFM®, la aguja más pequeña del mundo, para inyectar complejos ribonucleoproteicos (RNP) CRISPR/Cas9 directamente en el núcleo de células individuales, CellEDIT evita la necesidad de vectores. Esto permite la entrega simultánea de todos los componentes necesarios en concentraciones óptimas, asegurando modificaciones precisas con una mínima alteración celular, minimizando así también los efectos fuera del objetivo (Higo. 1). En resumen, CellEDIT allana el camino para una edición del genoma más confiable y consistente.

Vea CellEDIT en acción en este vídeo:

El servicio CellEDIT ofrece un flujo de trabajo optimizado diseñado para maximizar la eficiencia y la precisión: después de que el complejo RNP se inyecta en una sola célula, el proceso continúa con la expansión de la célula editada en una población clonal, seguida de la validación mediante métodos de secuenciación avanzados como Sanger. . secuenciación y deconvolución de secuencia. Este enfoque garantiza que las modificaciones genéticas deseadas se hayan logrado con alta precisión.

Durante el seminario web, el Dr. Beyer también mostró varios estudios de casos que ilustran las aplicaciones prácticas de la tecnología de CellEDIT:

1. Edición multiplex en celdas CHO-K1: La selección simultánea de tres genes (BAX, DHFR y FUT8) dio como resultado un proceso eficiente, con una alta tasa de supervivencia de las células editadas y una eliminación exitosa de los genes deseados. Es importante destacar que las mutaciones no alteraron la funcionalidad de las células. Lea la publicación completa revisada por pares en Biotechnology Journal (Figura 2.).
2. Knockout en líneas celulares difíciles de transfectar: A pesar de los desafíos, CellEDIT eliminó con éxito el gen HPRT1 en células SK-MES1, un tipo de célula sensible con un ciclo de crecimiento largo que se utiliza ampliamente en la investigación del cáncer y en las pruebas de esencialidad, y logró una expansión clonal exitosa y una alta eficiencia de edición. Descargue la nota de aplicación.
3. Eliminación dirigida de exones para imitar un modelo de ratón knockout: Este proyecto implicó una estrategia de edición personalizada que eliminaba exones específicos utilizando un enfoque de ARN de doble guía (ARNg). La capacidad de replicar con precisión modelos animales en líneas celulares proporciona a los investigadores herramientas valiosas para estudiar la función de los genes y los mecanismos de las enfermedades.
4. Inactivación de un sitio de unión de un factor de transcripción en una región reguladora de genes: Esto fue un desafío debido a la superposición de elementos genéticos, incluidos los exones de un gen vecino y la transcripción antisentido. Sin embargo, gracias a la experiencia científica y la edición precisa del equipo CellEDIT, el sitio objetivo se desactivó sin afectar las transcripciones circundantes, cumpliendo con el plazo del cliente y proporcionando la modificación exacta necesaria para confirmar la hipótesis del investigador. Lea el testimonio del cliente.

¡Conoce al equipo de CellEDIT! Consulte el artículo ‘Detrás del servicio CellEDIT: los expertos crean líneas celulares genéticamente modificadas de alta calidad para investigadores de todo el mundo’.

Conclusión: un futuro brillante para la ingeniería genómica

A medida que la ingeniería genómica continúa evolucionando, tecnologías como CellEDIT están allanando el camino para una edición genética más precisa y confiable. Ya sea abordando desafíos en células difíciles de transfectar, dirigiéndose a regiones genómicas específicas o realizando estudios knockout complejos, el servicio CellEDIT ya está ayudando a investigadores de ciencias biológicas y biología de todo el mundo al ofrecer edición de genes de alta calidad en modelos celulares en solo 10 semanas. y finalmente se encuentra. la creciente demanda de fabricación confiable de líneas celulares y de proporcionar a los investigadores las herramientas que necesitan para avanzar en su investigación.

Para aquellos que se perdieron el seminario web en vivo y están interesados ​​en profundizar en el servicio CellEDIT y los estudios de casos, pueden verlo a pedido aquí.

Para obtener más información sobre el flujo de trabajo del servicio CellEDIT, visite la página de CellEDIT, siga la página de LinkedIn del servicio CellEDIT y suscríbase al boletín para recibir noticias, ventas y más.

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