Procesamiento de tejidos congelados para proteómica y genómica
Esta publicación de blog fue escrita por Cureline, una CRO global de medicina traslacional y de precisión que brinda servicios de biobanco y laboratorios HBS para acelerar el desarrollo de I+D y Dx de medicamentos desde 2003. Sus servicios están disponibles en el mercado Scientist.com.
Los tejidos congelados pueden resultar difíciles de manipular, lo que provoca la degradación de valiosos biomarcadores. Cureline Molecular Services proporciona el servicio de criopulverización de tejidos que convierte una muestra de tejido congelada normal en múltiples alícuotas fáciles de usar con un peso de criopolvo definido.
El formato de muestra criopulverizada se recomienda encarecidamente para métodos analíticos posteriores sensibles. La preparación de alícuotas de polvo de tejido congelado permite:
- que mantiene la integridad de la biomolécula que se encuentra en la muestra de tejido original
- mejora la solubilidad del tejido en tampones de lisis
- Mayor producción e integridad de ácidos nucleicos y proteínas.
- mejor eficiencia de extracción de biomarcadores para múltiples análisis posteriores (RNA-Seq, DNA-Seq, PCR, proteómica, transcriptómica, etc.)
- generar múltiples alícuotas a partir de una única muestra de tejido congelada para una variedad de aplicaciones posteriores
Podemos utilizar muestras de tejido internas o proporcionadas por el cliente para su procesamiento. El tejido congelado se prepara utilizando un protocolo de criopulverización de tejido patentado NO-THAW (TM). El tejido en polvo se pesa en estado congelado y se prepara en alícuotas estándar de 100 mg (otros tamaños están disponibles a pedido). ¡Las alícuotas se envían en hielo seco y están listas para aplicaciones posteriores!
Por ejemplo, si tenemos un trozo de tejido de 0,5 gramos, podemos preparar hasta 5 alícuotas con 100 mg de polvo. Se preparan alícuotas de tejido para la extracción de ADN, ARN y proteínas utilizando protocolos comunes y kits disponibles comercialmente. Simplemente agregue un tampón de lisis apropiado y continúe con el protocolo de extracción.
La degradación del ARN durante la extracción de muestras de tejido congeladas puede ser un desafío importante. Cuando los tejidos se congelan y posteriormente se descongelan, los mecanismos que protegen el ARN de la degradación por las RNasas en las células vivas pueden verse comprometidos. Esto puede conducir a una rápida degradación del ARN.
Cureline Molecular Services ha desarrollado un protocolo patentado para aislar ARN de tejidos frescos congelados sin pérdida de integridad del ARN.
El protocolo único de aislamiento de ARN permite:
- mantener la integridad del ARN (RIN) que se encuentra en las muestras de tejido originales
- Mejor eficiencia de extracción y rendimiento que cualquier tipo de tejido.
- Peso de tejido más pequeño para aislar una cantidad suficiente de ARN.
- idoneidad para aplicaciones sensibles posteriores (RNA-Seq, etc.)
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